多重荧光定量PCR快速鉴定转基因玉米品系

采用多重实时荧光PCR技术的高通量特征,对转基因玉米MIR604、GA21、DAS-40278-9和98140的特异性靶标序列设计TaqMan-MGB荧光探针,通过退火温度和引物探针浓度梯度优化建立了四重实时荧光PCR检测方法,经特异性,重复性和灵敏性等方法学验证确认了方法的可靠性.MIR604、GA21、DAS-40278-9、98140 4个特异性基因的标准曲线回归方程分别为y=-3.263x+36.632,y=-3.422x+36.384,y=-3.294x+38.978 和 y=-3.278x+37.514;Ct 值变化范围分别在 23.556～37.524、22.893～37.412、25.304～39.110 和 24.501～37.618 之间;标准偏差分别在 0.078～0.476,0.085～0.463,0.120～0.487和0.148～0.353之间;相关系数R2分别为0.997,0.996,0.995和0.993;检出限可达10个拷贝,扩增效率满足欧盟等国际要求.