基于高内涵分析技术研究山萘酚的人肾近曲小管细胞HK-2毒性及机制

目的 基于高内涵分析技术探究山萘酚的肾细胞毒性作用及机制.方法 人肾近曲小管细胞HK-2分为细胞对照组(二甲亚砜终浓度<0.01％)、山萘酚5,10,20,50和100μmol·L-1组及多柔比星(Dox)10μmol·L-1组.Hoechst 33342染色和噻唑蓝(MTT)比色法分别检测活细胞数目和细胞存活率;荧光探针DCFH-DA,Mito-Tracker Red CMXRos和Fluo-4 AM分别检测活性氧(ROS)、线粒体膜电位(MMP)和Ca2+内流水平;化学发光法检测细胞ATP含量;AnnexinⅤ/PI双染法检测细胞凋亡率;Hoechst 33342染色检测DNA含量;免疫荧光法检测NF-κB p65入核情况,以及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路蛋白〔p38 MAPK、磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)、c-Jun N端激酶(JNK)、p-JNK、细胞外信号调节激酶(ERK)和p-ERK〕和酪氨酸激酶2(JAK2)/信号转导与转录激活因子3(STAT3)通路蛋白(p-STAT3和STAT3)的表达.结果 与细胞对照组相比,山萘酚5,10,20,50和100μmol·L-1组活细胞数目明显减少(P<0.05,P<0.01);山萘酚10,20,50和100μmol·L-1组细胞存活率显著下降(P<0.05,P<0.01);山萘酚10,20,50和100μmol·L-1组细胞ROS水平升高(P<0.05,P<0.01);山萘酚5,10,20,50和100μmol·L-1组细胞MMP下降(P<0.01);山萘酚50和100μmol·L-1组细胞Ca2+内流水平明显升高(P<0.05,P<0.01),ATP含量明显降低(P<0.05,P<0.01);山萘酚20,50和100μmol·L-1组细胞凋亡率均明显升高(P<0.05,P<0.01);山萘酚各剂量组DNA含量均无明显变化.免疫荧光检测结果显示,山萘酚50和100μmol·L-1使NF-κB p65发生磷酸化并入核;山萘酚上调MAPK通路p-p38 MAPK,p-ERK,p-JNK和JNK蛋白及JAK2/STAT3通路p-STAT3蛋白的表达(P<0.05,P<0.01).结论 山萘酚对HK-2细胞有明显毒性,机制与其促进ROS水平升高而介导氧化应激损伤和细胞凋亡有关.