不同浓度EPA和DHA对C2C12 肌管细胞IL-6表达及TRPV1/PKC/Ca2+信号通路的影响

目的 探讨不同浓度二十碳五烯酸(eicosapentaenoic acid,EPA)和二十二碳六烯酸(docosahexaenoic acid,DHA)对C2C12 肌管细胞IL-6 表达与分泌的调节作用和机制.方法 采用 25、50、100、200、400μmol/L EPA或DHA处理C2C12 肌管细胞 12、24、36 h,设立BSA对照组.MTT检测细胞活性,PCR与Western blot分别检测IL-6 的mRNA与蛋白表达水平,ELISA测定IL-6 分泌水平,检测TRPV1、PKC的mRNA表达水平及TRPV1、PKC、p-PKC蛋白表达水平,Fluo-4 AM钙离子荧光探针检测胞内Ca2+浓度.结果 IL-6 表达与分泌方面,100μmol/L EPA或DHA干预 24h可显著提高肌管细胞IL-6 mRNA表达;100μmol/LEPA或DHA干预 24h、36h可显著促进IL-6 分泌;100μmol/L EPA或DHA可呈时间梯度上调IL-6 蛋白表达水平.各浓度EPA或DHA干预肌管细胞 24h后,IL-6 mRNA表达水平与分泌均呈浓度梯度增加,其中 200、400μmol/L效果最为显著;50、100、200μmol/L EPA与 25、50、100、200μmol/L DHA干预组IL-6 蛋白质表达水平较对照组均显著增加,100μmol/L EPA和DHA增加IL-6 蛋白表达最为显著.信号通路方面,100、200、400μmol/L EPA与DHA显著提高肌管细胞TRPV1 mRNA表达水平;200、400μmol/L EPA与 100、200、400μmol/L DHA干预组TRPV1 蛋白表达水平较对照组显著升高.400μmol/L EPA与DHA可显著上调PKC mRNA表达水平;100、200、400μmol/L EPA干预组p-PKC蛋白表达水平与p-PKC/PKC比值显著增高,而 200、400μmol/L DHA可显著增加肌管细胞PKC、p-PKC蛋白表达水平以及p-PKC/PKC比值.各浓度EPA与DHA干预组均显著增加肌管细胞胞内 Ca2+含量.结论 EPA与 DHA在适宜浓度可以促进 C2C12 肌管细胞 IL-6 的表达与分泌,EPA和 DHA可能通过TRPV1/PKC/Ca2+信号通路刺激肌源性IL-6 的表达与分泌.