天南星、半夏的PCR-RFLP鉴别

目的:近年来,随着半夏和天南星的野生资源急剧下降、药材栽培技术不成熟等问题出现,市场的混伪品频繁出现,而其主要鉴别特征在药材流通中大多消失.因此,迫切需要建立一种可以快速、有效鉴别天南星和半夏特异性的分子鉴定方法.方法:通过比对天南星、半夏及其混伪品的rbcL序列,分别选择了天南星和半夏的特异性酶切位点HaeⅢ和Dra Ⅰ,采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)进行鉴定,建立并优化了 PCR-RFLP反应主要体系条件,并对其耐用性和正品、掺杂品及混伪品的检出能力进行了考察.结果:建立了天南星和半夏药材的PCR-RFLP鉴别方法,在退火温度为54℃、循环次数为35个,DNA模板量为3～30ng时,天南星和半夏经过特异性引物扩增后,分别能被HaeⅢ和Dra Ⅰ限制性内切酶酶切,产生两片段或切开的小片段,并在100～250 bp出现单一条带,而混伪品无法酶切,且均在250 bp出现条带,该方法对天南星或半夏的掺杂品和混伪品具有高度准确的鉴别能力.结论:该研究建立的PCR-RFLP方法可以快速鉴别天南星、半夏.