'赤霞珠'葡萄未成熟合子胚的体细胞胚发生研究

为建立'赤霞珠'葡萄(Vitis vinifera'Cabernet Sauvignon')体细胞胚再生体系,以花后80 d未成熟合子胚为外植体,探究了促进初生胚萌发的最佳处理方式以及激素组合对次生体细胞胚直接与间接发生的影响.采用不同浓度(1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 g·L?1)赤霉素处理、不同时长(2、5、10、15、30 min)超声处理、不同破皮方式(切割种背、切喙+切割种背、磨砂)处理诱导初生胚,进而将已获取初生胚的子叶、胚轴、胚根分别切段放置于添加4种不同浓度的2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D;0.5、1.0、1.5、2.0 mg·L?1)和6-苄氨基嘌呤(6-BA;1.0、2.0、3.0、4.0 mg·L?1)组合的MS培养基中循环诱导次生胚.结果表明:在初生胚诱导中,2.5 g·L?1赤霉素、超声2 min、切喙+切割种背三种处理可大幅提高初生胚的诱导率,11 d时诱导率分别为97.28％、98.64％与92.47％,对照组仅68.42％;在次生胚诱导中,添加0.5、1.0、1.5 mg·L?12,4-D和1.0、2.0、3.0 mg·L?16-BA的MS培养基有利于愈伤组织增殖并可通过间接途径产生体胚,90 d时诱导率在6.45％～17.15％之间.在添加4种不同浓度2,4-D和6-BA组合的MS培养基中,2.0 mg·L?12,4-D和4.0 mg·L?16-BA组合的体细胞胚诱导率最高,90 d成胚率达到21.33％,次生胚在子叶褐化处直接形成.94％的正常次生胚可萌发并再生植株,生根率达100％.本研究所建立的'赤霞珠'未成熟合子胚体细胞胚诱导方法为葡萄属植物再生体系优化完善和遗传转化应用研究提供参考依据.