半乳糖凝集素-9在白血病微血管内皮细胞上的表达及其对CIK细胞影响的初步研究

目的:探讨内皮细胞在高表达半乳糖凝集素-9(Gal-9)对CIK细胞杀伤活性、凋亡率和跨内皮迁移的影响.方法:收集确诊的9例急性髓系白血病(AML)患者(不包括AML-M3)、8例急性淋巴细胞白血病(ALL)患者、5例慢性淋巴细胞白血病(CLL)患者和6例健康对照者(HDs)的骨髓标本,利用流式细胞术检测Gal-9的表达.用慢病毒载体构建高表达Gal-9的病毒颗粒转染脐静脉内皮细胞系(EAhy 926细胞),应用PCR、Western Blot进行验证转染效率,将不同表达水平Gal-9的内皮细胞与CIK细胞共培养,应用GGK-8、流式细胞术、免疫荧光强度检测法检测共培养不同时间后CIK细胞的杀伤活性、凋亡率和跨内皮迁移率的变化.结果:人组患者的年龄、性别比较差异无统计学意义,AML和ALL患者骨髓中Gal-9表达明显高于CLL患者和HDs[AML(83.41±24.38)％,ALL(89.06±16.27)％vs CLL(59.33±34.43)％,HDs(4.48±3.62)％,P=0.000 8].与未转染高表达Gal-9的内皮细胞比较,高表达Gal-9的内皮细胞与CIK细胞共培养后,CIK细胞杀伤活性相对降低(135.10±37.51 vs 187.70±57.59),凋亡率增加[(28.45±6.15)％vs(23.93±3.47)％],并且CIK细胞跨内皮细胞迁移率降低.结论:白血病细胞中Gal-9高表达,CIK细胞表面Tim-3的表达增加,提示Gal-9/Tim-3途径可能影响CIK细胞治疗白血病的生物学效应;而内皮细胞高表达Gal-9则可能促进CIK细胞凋亡,影响CIK细胞的迁移和细胞杀伤效应,Tim-3单抗干预后可在一定程度上缓解相应的抑制效应.因此,CIK细胞治疗疗效的差异可能与Gal-9/Tim-3途径相关.