人促红素注射液生物学活性体外法的ELISA验证

本研究用双抗体夹心ELISA(酶联免疫吸附试验)检测人促红素注射液(Human erythropoietin injec-tion,EPO)中 EPO 效价,并对其进行方法学验证.研究从准确度、重复性、中间精密度、线性、耐用性等各方面,对ELISA检测EPO建立的体外生物活性测试方法进行方法学验证.在准确度验证中,不同浓度供试品测定的回收率在87.20％～118.40％之间,同一浓度的6份样品的加标回收率为93.5％～107.2％之间;将5个不同浓度的供试品分别为2.5,5,20,50,100 mIU/mL进行3次重复性试验,结果RSD均＜20％;在中间精密度验证过程中,在不同时间由不同人员各操作测定,检测结果的RSD=0.019％,＜20％,人员和时间对结果均无统计学意义影响(P＞0.05,F=0.043);线性验证实验结果表明,人促红素国家标准品和EPO成品重复3次的R2分别为0.987 2,0.996 8,0.989 3,0.997 8,0.998 8,0.985 6,均＞0.98;在试验加入终止液后,不同长度时间间隔内的生物学活性测定结果均无统计学差异(One-way ANOVA检验,α=0.05,P＞0.05,P(3)=0.354,P(6)=0.559,P(9)=0.679,P(12)=0.854).本研究对EPO的双抗体夹心ELISA检测体系进行方法学验证,表明该ELISA方法专属性强、灵敏度高,结果稳定,可满足2020版版药典对人促红素注射液生物学活性体外效价质控的检测,可用于EPO效价的测定.