人来源脂肪干细胞对特发性血小板减少性紫癜小鼠疗效分析

目的 通过注射人来源脂肪干细胞(hADSC),了解hADSC能否改善特发性血小板减少性紫癜(ITP)小鼠血小板水平和调控辅助性T细胞(Th)细胞免疫功能紊乱.方法 选择无特定病原体级健康白变种实验室(BALB/c)雌性小鼠30只,体质量为15～25 g,鼠龄6～8周.选择年龄21～36岁女性健康志愿者6例,通过外科医生无菌条件下获取的不再临床应用的人体脂肪组织.应用贴壁细胞培养法及梯度离心法,将分离后脂肪干细胞鉴定、培养和增殖;将30只BALB/c小鼠随机分为正常组、对照组和治疗组,除了正常组,对照组和治疗组小鼠按免疫法建立小鼠ITP模型.建模后,治疗组输注hADSC,而对照组则注射等量的磷酸盐缓冲溶液(PBS).再用血细胞分析仪检测各组外周血血小板,用酶联免疫吸附分析(ELISA)法检测外周血血小板相关免疫球蛋白(PAIgG)和Th1/Th2/Th3/Th17细胞因子水平,并用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测脾脏组织中相关因子mRNA表达.结果 与正常组干扰素γ(IFN-γ)(128.44 pg/mL±10.29 pg/mL)、白细胞介素(IL)2(20.14 pg/mL±2.65 pg/mL)、IL-17(22.42 pg/mL±5.70 pg/mL)、IL-4(53.67 pg/mL±8.27 pg/mL)、IL-10(68.28 pg/mL±5.53 pg/mL)及转化生长因子 β1(TGF-β1)(117.21 pg/mL±15.15 pg/mL)相比,ITP 小鼠外周血 IFN-γ(164.16 pg/mL±11.76 pg/mL)、IL-2(31.48 pg/mL±4.61 pg/mL)、IL-17(29.92 pg/mL±3.26 pg/mL)水平明显升高,IL-4(31.17 pg/mL±5.35 pg/mL)、IL-10(41.40 pg/mL±5.73 pg/mL)、TGF-β1(63.96 pg/mL±7.47 pg/mL)水平明显降低,差异均有统计学意义(P＜0.05).治疗组输注hADSC后,其外周血血小板[(580±89)×109/L]明显上升,PAIgG(18.26 pg/mL±0.84 pg/mL)水平明显下降(均P＜0.01),同时 Th1/Th2/Th3/Th17 细胞因子 IFN-γ(130.59 pg/mL±14.16 pg/mL)、IL-2(22.09 pg/mL±3.78 pg/mL)、IL-17(24.19 pg/mL±6.79 pg/mL)水平 下降,而 IL-4(48.81 pg/mL±6.02 pg/mL)、IL-10(62.35 pg/mL±7.09 pg/mL)、TGF-β1(104.47 pg/mL±16.30 pg/mL)的水平均升高(均 P＜0.05).通过对小鼠脾脏组织检测相应的Th细胞因子mRNA表达,其表达变化与外周血细胞因子结果基本一致.结论 hADSC可能通过调控Th1/Th2/Th3/Th17细胞及其因子水平,进而改善ITP机体细胞免疫功能紊乱,改善ITP小鼠血小板水平.