基于DNA熔解曲线分析技术的前胡及其混伪品快速分子鉴定

目的:本研究旨在建立熔解曲线分析方法以实现简便快速直观地鉴别前胡及其混伪品.方法:采用硅胶吸附柱法抽提前胡及其混伪品的总基因组DNA,筛选合适引物,对引物浓度、模板浓度、退火温度和循环次数进行优化,建立前胡及混伪品样品的DNA熔解曲线鉴别方法,并对该方法进行验证.结果:核糖体DNA第二内部转录间隔区(ITS2)为适合的鉴别引物,在引物浓度0.20～0.40 μmol/L,DNA模板浓度0.62～15.58 ng/μ L,退火温度为53～54℃,循环数为35～45时可获得稳定、均一、特异性的PCR扩增.随后对比熔解曲线熔解温度(Tm值),即可实现前胡药材真伪及掺伪品鉴别,对掺伪品的检测限可低至5％.结论:本方法灵敏度高、特异性好、检测速度快、直观性强,通过进行熔解曲线Tm值比对即可区分不同前胡样品,在该药材的混伪品快速检测方面具有独特的优势.