基于免疫磁珠法的不同筛选方案对胎儿有核红细胞富集效果的比较

目的:将密度梯度离心(density gradient centrifugation,DGC)与免疫磁珠法(magnetic-activated cell sorting,MACS)相结合,应用4种不同的筛选方案,对脐血中的胎儿有核红细胞(fetal nucleated red blood cells,FNRBC)进行分离,评估不同策略富集FNRBC的效果.方法:对10例脐血标本(12 mL/例)按4种不同方案进行筛选:DGC;DGC+MACS阴性筛选(CD45-);DGC+MACS阳性筛选(CD71+);DGC+MACS阴性/阳性筛选(CD45-/CD71+).通过细胞计数板计数,K-B染色后显微镜下人工FNRBC计数,从获得总细胞量、FNRBC量和FNRBC比例经t检验后评估不同方案富集FNRBC的效果.结果:①与其他3组相比,DGC方案可获得的总细胞量(0.95×107/mL)最多,FNRBC数量(39.87/mL)最多,FNRBC比例最低(0.004‰),差异均具有统计学意义(均P=0.000);②与其他3组相比,DGC+MACS阴性/阳性筛选(CD45-/CD71+)组合法所获得的总细胞量最少(0.81×106/mL),获得FNRBC数量也最少(7.47/mL),差异均具有统计学意义(均P=0.000);③DGC+MACS单种抗体筛选方案中,DGC+MACS阳性筛选(CD71+)所获得总细胞量为1.99×106/mL,较DGC+MACS阴性筛选(CD45-)(2.56×106/mL)低,差异有统计学意义(P=0.000),而两方案所得FNRBC数量之间差异无统计学意义(P=0.910);④DGC+MACS阴性筛选(CD45-),DGC+MACS阳性筛选(CD71+),DGC+MACS阴性/阳性筛选(CD45-/CD71+)所得FNRBC比例之间差异无统计学意义(P=0.030、0.050、0.210).结论:DGC方案获得FNRBC数量最多;DGC+MACS阴性/阳性筛选(CD45-/CD71+)方案去除混杂细胞能力最强.在不降低获取目标细胞数量基础上,DGC+MACS阳性筛选(CD71+)方案富集FNRBC效果最好.