佛手柑内酯对人牙髓干细胞成骨分化的影响

目的:探究佛手柑内酯(bergapten,BP)对人牙髓干细胞(human dental pulp stem cell,hDPSC)成骨分化的影响.方法:流式鉴定hDPSC的表面特异性抗原;使用CCK-8法检测BP的生物毒性与生物安全性;将hDPSC随机分为对照组与BP组,BP组分别加入含7.5、15.0、30.0 μmol/L BP的完全培养基,对照组加入含等体积二甲基亚砜溶液(dimethyl sulfoxide,DMSO)的完全培养基,采用荧光显微镜观察各组细胞形态.使用BCIP/NBT碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)显色及ALP定量检测法检测BP对hDPSC早期成骨分化的影响;使用茜素红(alizarin red S,ARS)染色法及半定量分析法评估成骨分化晚期细胞外基质矿化程度;利用实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测BP对于Runt相关转录因子2(Runt-related transcription factor 2,RUNX2)、骨钙素(osteocalcin,OCN)、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)、ALP等成骨标志基因表达水平的影响;使用免疫印迹分析检测成骨分化蛋白指标的变化.结果:CCK-8实验结果表明7.5、15.0、30.0μmol/LBP生物安全性较好(P＜0.01);与对照组相比,BP组细胞ALP染色更明显,15.0 μmol/L组ALP活性水平更高(P＜0.01);与对照组相比,BP组细胞外基质矿化水平更高,15.0 μmol/L BP处理后结节最多最深;与对照组相比,BP组成骨相关基因和蛋白的表达均明显增多且15.0 μmol/L处理略优(P＜0.01).结论:一定浓度的BP具有良好的生物安全性,且能对hDPSC的成骨分化产生促进作用,15.0 μmol/L成骨诱导效果较优.