改良全骨髓贴壁法分离及培养大鼠骨髓间充质干细胞

目的 建立简单、优化的分离及培养大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)的方法,为组织工程支架研究提供细胞基础.方法 分别采用常规和改良的全骨髓贴壁法分离和培养BMSCs.常规法按照传统全骨髓贴壁法,对骨髓冲洗液进行过筛和离心处理后加入完全培养基进行培养.在改良全骨髓贴壁法中,将骨髓冲出骨髓腔后直接加入完全培养基进行培养.倒置相差显微镜下观察两组细胞形态,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法比较两组BMSCs的增殖活性,流式细胞术检测表面标志物CD90、CD29、CD11b/c、CD45.对改良法培养的BMSCs进行定向诱导成骨及成脂分化,并通过茜素红染色检测其成骨分化潜能,通过油红O染色检测其成脂分化潜能.结果 改良全骨髓贴壁法培养的BMSCs形态均一,细胞集簇排列呈"鱼群状""漩涡状".改良法比常规法培养的BMSCs增殖活性强(P＜0.05).改良法与常规法培养的BMSCs均高表达CD90和CD29,低表达CD11b/c和CD45.改良法培养的BMSCs成骨、成脂诱导分化后茜素红染色和油红O染色均为阳性.结论 改良全骨髓贴壁法可成功分离并培养BMSCs,培养的BMSCs具有多向分化潜能,为组织工程支架的研究奠定了细胞基础.