不同制备方式的柴胡—黄芩药对对流感病毒的体外抑制作用及其机制研究

目的 比较不同制备方式的柴胡—黄芩药对对甲型H1 N1流感病毒的体外抑制作用,进而筛选出最适制备方式并基于自噬途径探讨其潜在作用机制.方法 以中药复方体外实验的三种常用方式制备柴胡—黄芩水提醇沉提取液、颗粒剂及含药血清,运用AlamarBlu?细胞毒性检测和神经氨酸酶活性检测法观察不同制备方式的抗病毒药效,并用非线性回归法计算不同制备方式的柴胡—黄芩药对对狗肾细胞株(Madin-Darby canine kidney,MDCK)的半数细胞毒性浓度(concentration of cytotoxicity 50％,CC50)、半数有效浓度(concentration for 50％of maximal effect,EC50)及选择性指数(selectirity index,SI)筛选出最适制备方式,并进一步采用免疫蛋白印记法检测自噬相关蛋白并探讨其对流感所致自噬的影响.结果 柴胡—黄芩颗粒剂在0～1.56 mg/mL的浓度范围内对MDCK细胞的正常生长没有影响,存活率大于97％,且在此无毒范围内对甲型流感病毒神经氨酸酶活性具有一定的抑制作用,EC50为2.597 mg/mL,抗病毒选择指数为2.小鼠血清使细胞活力更强,细胞存活率高于100％,并与病毒感染组相比,对神经氨酸酶活性具有显著抑制作用(P<0.01).免疫蛋白印记结果显示,与正常组相比,病毒感染组自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、beclin-1表达水平显著升高(P<0.01、P<0.05),p-mTOR蛋白表达水平显著下降(P<0.01).与病毒感染组相比,柴胡—黄芩颗粒剂可以下调LC3-Ⅱ、beclin-1并上调p-mTOR蛋白表达水平(P<0.05、P>0.05、P<0.01).结论 柴胡—黄芩药对在一定浓度下具有抗病毒作用,其体外抑制作用最适制备方式为柴胡—黄芩颗粒剂,其机制可能为通过调节宿主细胞自噬而发挥抗病毒的作用.