阿瑞匹坦抑制SFN蛋白对非小细胞肺癌细胞上皮间质转化机制研究

目的 研究分层蛋白Stratifin(SFN)对非小细胞肺癌A549细胞上皮间质转化(EMT)和迁移、侵袭的调控作用,以及阿瑞匹坦对SFN功能的影响.方法 通过瞬时转染技术将siSFN-1、siSFN-2、SFN、NC基因转入A549细胞中,Western blot实验检测SFN、E-钙黏蛋白、N-钙黏蛋白以及波形蛋白表达水平,细胞划痕实验和Tr-answell实验检测细胞迁移、侵袭作用;通过CCK8实验检测阿瑞匹坦对过表达SFN的A549细胞在24、48、72 h增殖的调控能力;根据CCK8测得的药物IC50值进一步探索阿瑞匹坦不同浓度(16、8、4μmol/L)作用于过表达SFN的A549细胞48 h后的SFN、E-钙黏蛋白、N-钙黏蛋白、波形蛋白的表达以及细胞迁移、侵袭的变化.结果 24、48、72 h的细胞增殖-毒性实验中,随着阿瑞匹坦作用于细胞的时间不断延长,细胞增殖能力也随之出现逐渐下降趋势,药物抑制作用显著(P<0.05).划痕实验结果表明转染SFN基因的A549细胞迁移距离明显高于NC、siSFN-1、siSFN-2组(P<0.05).安慰剂组的迁移距离较16、8、4μmol/L阿瑞匹坦组迁移距离长;并且在16、8、4μmol/L瑞匹坦组中,细胞迁移距离随浓度降低逐渐加长(P<0.05).Transwell迁移和侵袭实验中转染SFN的A549细胞迁移和侵袭的细胞数量多于NC、siSFN-1、siSFN-2组(P<0.05).安慰剂处理组的细胞迁移和侵袭数量较16、8、4μmol/L阿瑞匹坦组多;并且在16、8、4μmol/L瑞匹坦组中,细胞迁移和侵袭的数量随着阿瑞匹坦浓度降低逐渐增多(P<0.05).Western blot分析显示过表达SFN促使上皮标志物E-钙黏蛋白减少,间质标志物N-钙黏蛋白和波形蛋白增加(P<0.05).安慰剂组E-钙黏蛋白较不同浓度阿瑞匹坦组减少,N-钙黏蛋白和波形蛋白较不同浓度阿瑞匹坦组明显增多;阿瑞匹坦组中随浓度增高E-钙黏蛋白增多,N-钙黏蛋白减少(P<0.05).结论 过表达SFN能够促进非小细胞肺癌的上皮间质转化和迁移、侵袭,而阿瑞匹坦可以通过抑制SFN表达进而抑制其介导的上皮间质转化和迁移、侵袭.