水飞蓟宾对结直肠癌细胞DNA损伤应答的影响

目的 探究水飞蓟宾对结直肠癌细胞DNA损伤应答的影响,并探讨其相关分子机制.方法 将结直肠癌HCT116和HT29细胞分为空白对照组(DMSO)和水飞蓟宾给药组,给药组按药物浓度分为12.5、25、50、100、200μg/mL 5组.通过倒置显微镜观察给药后各组细胞的生长状态变化;采用CCK-8法检测水飞蓟宾处理后各组细胞的活力变化;采用免疫荧光法(IF)、免疫印迹法(WB)检测水飞蓟宾处理后各组细胞的DNA损伤和细胞周期相关蛋白的表达水平,包括p21、Cy-clinB1、Phospho-Chk2t68、Aurora A的表达水平;流式细胞术检测细胞周期分布.结果 与空白组比较,水飞蓟宾对结直肠癌HCT116和HT29细胞具有明显的生长抑制作用,其抑制率随着给药浓度的增加而增强(P<0.05);与空白对照组相比,水飞蓟宾给药组DNA损伤反应蛋白γ-H2Ax表达明显升高,并且呈药物作用时间和浓度依赖性;细胞周期相关蛋白CyclinB1、Aurora A表达下调,且随着浓度的增加和作用时间的延长逐渐降低,p21、P-Chk2蛋白的表达逐渐上调,随着给药浓度的增加逐渐升高(P<0.05).结论 水飞蓟宾可以抑制结直肠癌HCT116和HT29细胞的增殖、诱导细胞DNA双链断裂损伤、细胞周期阻滞,这些结果提示水飞蓟宾可能通过DNA的损伤应答从而抑制结直肠癌的发生发展.