马立克氏病病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立与应用

根据马立克氏病病毒PP38基因的一段特异性保守序列设计引物,将MDV的PP38基因构建到19T载体上,将获得的重组质粒作为标准阳性模板,建立了针对马立克氏病病毒的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法,并对该方法的特异性、灵敏性和重复性进行了评价.结果显示,所建立的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR方法的Ct值与标准品在6.53×101～6.53×108 copies/μL范围内呈良好的线性关系,其线性相关系数R2=0.998 8,标准曲线方程为Y=-3.271X+39.297,熔解曲线呈现单峰,无非特异性扩增.且检测J亚群禽白血病病毒(ALV-J)、新城疫病毒(NDV)、传染性支气管炎病毒(IBV)、禽流感病毒(AIV)和鸡传染性贫血病毒(CIAV)时结果均呈阴性,具有良好的特异性.对20份临床组织样品检测结果进行分析发现,与普通PCR检测结果相比阳性率高出20％.本研究建立的检测MDV的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR方法可用于马立克氏病病毒的快速诊断,对马立克氏病的监测具有重要意义.