肠道黏膜新城疫病毒特异性sIgA抗体ELISA检测方法的建立

为建立检测肠道黏膜新城疫病毒(NDV)特异性sIgA抗体的ELISA方法,通过原核表达并纯化的重组NDV HN蛋白作为包被抗原,构建检测肠道黏膜NDV特异性sIgA抗体的间接EL1SA方法,并利用该方法检测各肠段黏膜新城疫特异性sIgA抗体含量,探讨了 NDV黏膜免疫抗体水平的变化规律.结果显示,成功表达并纯化了 HN蛋白,确定的最佳ELISA方案为:重组NDVHN蛋白包被质量浓度为0.5 μg/mL,100 μL/孔,封闭液为50 mg/mL脱脂奶粉溶液,黏膜洗脱液稀释度为1∶40,作用时间为1.5 h,二抗作用时间为1 h,稀释度为1∶ 100 000,显色时间为10 min.ELISA重复性试验的批内变异系数在2.63％～7.68％之间,批间变异系数在1.43％～7.63％之间.本方法与包被全NDV建立的ELISA方法的符合率达到91.30％.使用本方法检测口服免疫含HN抗原重组乳杆菌(BLCC2-0394)的鸡十二指肠、空肠、回肠和盲肠黏膜中NDV特异性sIgA抗体水平,结果显示,免疫后第19天NDV特异性sIgA抗体显著高于空白对照组(P＜0.01),第23天抗体水平达到最高,第26天出现下降趋势.结果表明,所建立的以重组HN蛋白为包被抗原的ELISA检测方法可用于肠道黏膜NDV特异性抗体的检测.