猪PCSK9单克隆抗体的制备及其在PRRSV感染过程中的应用

实验室前期shot-gun质谱结果表明PCSK9在PAM空细胞和PRRSV感染组PAM细胞间存在差异表达.为了深入研究PCSK9与PRRSV间的相互作用机制,本实验在体外合成猪PCSK9基因并克隆至原核表达载体pET-28a中,构建重组表达质粒pET-28a-PCSK9.利用该原核表达系统获得了高效表达的重组蛋白PCSK9(约75 kDa),进一步通过镍柱亲和层析技术纯化重组蛋白PCSK9作为免疫原,皮下免疫5-6周龄的BALB/c小鼠(100 ng/只),获得了1株产生PCSK9特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株(2A2B12).应用此单克隆抗体对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染PAM细胞后的内源性PCSK9变化情况进行了检测.Western blot和IFA结果表明本实验制备的PCSK9单克隆抗体具有良好的特异性,抗体针对的表位位于PCSK9的C端结构域(463-705 aa);此外,Western blot结果表明PRRSV感染可抑制PCSK9蛋白的表达,过表达PCSK9对PRRSV的复制有明显的抑制作用.本研究中研制的抗体可为今后猪源PCSK9与PRRSV的相互作用研究提供工具支持.