小鼠RNA结合蛋白QKI-5的生物信息学和组织表达分析及其过表达对癌症相关基因表达的影响

[目的]旨在构建小鼠Quaking基因的主要转录本Quaking-5(Qki-5)的真核表达载体,利用生物信息学软件预测分析其结构与功能特征,检测该基因的组织表达谱,并在小鼠AML12肝细胞系中探究Qki-5过表达对癌症相关基因表达的影响.[方法]提取小鼠肝脏组织的总RNA,反转录为cDNA,通过PCR扩增Qki-5转录本的蛋白编码区(Coding Sequence,CDS)全长,将获得的目的片段与线性化载体pcDNA3.1-Puro-N-3HA进行同源重组连接以获得pcDNA3.1-mQki-5.通过在线软件对Qki-5基因序列及其编码蛋白进行生物信息学分析,并利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测Qki-5基因在小鼠不同组织中的表达谱,同时使用免疫组织化学技术检测QKI-5蛋白在小鼠肝脏组织的表达分布.之后,将pcDNA3.1-mQki-5重组质粒和pcDNA3.1-Puro-N-3HA空质粒分别转染至AML12细胞,通过qPCR和Western Blotting(WB)检测Qki-5基因在mRNA和蛋白水平的表达,并进一步检测Qki-5基因在AML12细胞中过表达后对癌症相关基因表达的影响.[结果]成功构建了pcDNA3.1-mQki-5真核表达载体;小鼠Qki-5基因的CDS区长度为1026 bp,共编码341个氨基酸;小鼠QKI-5蛋白为亲水性蛋白,不含跨膜结构和信号肽,存在26个磷酸化位点,且小鼠QKI-5蛋白的三级结构与人和大鼠完全一致;在检测的12个组织中,Qki-5在小鼠全脑的表达量最高,在十二指肠的表达量最低;QKI-5在小鼠肝脏组织中主要表达于肝细胞细胞核中;在AML12细胞过表达QKI-5后,会引起癌症相关基因P53和Ccnd1的mRNA表达水平显著升高.[结论]研究成功构建了小鼠Qki-5基因真核表达载体;Qki-5基因在小鼠全脑、肺脏等组织中表达量较高;QKI-5主要表达分布于小鼠肝细胞细胞核内;此外,在AML12细胞中QKI-5的过表达会引起P53和Ccnd1的表达水平升高.研究为进一步探究小鼠Qki-5基因的功能提供了关键材料.