猪细小病毒VP2基因在家蚕中的高效表达及免疫原性评估

猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)可引起猪(Sus scrofa domesticus)繁殖障碍,疫苗是预防猪细小病毒病、提高母猪抗病力和繁殖率的有效方法.为高效表达猪细小病毒结构蛋白VP2基因及制备猪细小病毒基因工程亚单位疫苗,根据家蚕密码子频率将PPV-VP2的基因序列进行优化合成,并将此目的基因片段连接到转移载体,通过共转染将目的基因重组到orf1629基因缺损的亲本病毒BmBacmid上,获得重组杆状病毒(Recombinant baculovirus)rBmNPV(PPV-VP2).将重组杆状病毒rBmNPV(PPV-VP2)感染家蚕(Bombyx mori)蚕蛹,并用表达的抗原制作疫苗,采用豚鼠(Cavia porcellus)进行疫苗效力试验.经Western blot和质谱分析、电镜观察表达产物.结果表明,在蚕蛹中成功表达出可自组装成病毒空衣壳颗粒的目的蛋白;表达蛋白产物经血凝反应测定,每克蚕蛹表达的抗原效价相当于200剂以上商用疫苗;用表达产物制备成3种抗原剂量的疫苗免疫豚鼠,均产生抗体反应,其抗体能在体外中和PPV病毒.即使每克蚕蛹制备200头份疫苗免疫豚鼠,其血凝抑制效价(hemagglutination inhibition,HI)也达到了1:128,中和抗体效价达到1:83,不低于市售商品苗免疫产生的效价.本研究为猪细小病毒亚单位空衣壳疫苗提供了低成本生产方法.