转基因玉米ND207转化事件特异性定性PCR检测方法及其标准化

转基因玉米ND207是中国农业大学研发的转mCry1Ab和mCry2Ab基因的抗虫玉米,本研究的目的是建立ND207转化事件特异性定性PCR检测方法.根据研发者提供的引物进行PCR扩增,PCR产物测序分析,获得了5'端旁侧序列262 bp,包括109 bp的载体序列和153 bp的玉米基因组序列,3'端旁侧序列316 bp,包括76 bp的载体序列和240 bp的玉米基因组序列.针对两端旁侧序列设计14条引物,组成25对引物组合进行引物筛选,选中3'端一对最佳引物优化PCR反应体系及反应条件,建立ND207的转化事件特异性定性PCR检测方法,PCR产物片段大小为166 bp.经过测试,该方法的检出限为0.1％,相当于20个拷贝的ND207特异分子片段.国内8家转基因生物安全检测机构对本方法进行了特异性测试、检出限测试和再现性测试,循环验证报告显示:该方法符合国家标准方法的各项要求,可在检测行业推广应用.ND207转化事件特异性定性PCR检测方法的建立,为我国ND207及其衍生品系的安全监管提供技术支撑.