池蝶蚌IκBα和c-Rel的结构特征及在LPS刺激下的表达分析

为研究淡水贝类NF-κB/Rel信号通路中核因子κB(Nuclear factor-κappaB,NF-κB)和NF-κB抑制因子(Inhibitors of NF-κB,IκB)的功能,对池蝶蚌(Hyriopsis schlegelii)IκBα和c-Rel(以下简称HsIκBα和Hsc-Rel)的序列结构、表达特征及HsIκBα和Hsc-Rel之间的相互关系进行了分析.结果表明,HsIκBα的cDNA全长为1783 bp,其开放阅读框(Open Reading Frame,ORF)为1083 bp,编码360个氨基酸.Hsc-Rel的cDNA为2414 bp,ORF为2298 bp,编码765个氨基酸.通过构建HsIκBα-ORF-GST和Hsc-Rel-RHD-HIS重组质粒、原核诱导表达和纯化,进行GST-pull down,通过SDS-PAGE和Western Blot检测研究,发现HsIκBα和Hsc-Rel-RHD存在直接的相互作用.通过对池蝶蚌进行脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)刺激后,分别在7个时间点(0、6h、12h、24h、36h、48h和72h)对10个组织中HsIκBα和Hsc-Rel的mRNA表达差异性进行分析,结果显示:HsIκBα和Hsc-Rel的mRNA在所有组织都有表达,且在肝胰腺组织表达最高,在血细胞表达最低.在6h时,HsIκBα在8个组织中和Hsc-Rel在7个组织中的表达水平都出现下调;在12h时,HsIκBα在10个组织中的表达量都上调,并且都达到了峰值.Hsc-Rel只有血细胞、心脏、肝胰腺和肠出现上调;在24h时,HsIκBα在10个组织中的表达值呈现下调,Hsc-Rel却都出现上调(肾组织除外),其中血细胞、斧足、肠的表达值达到峰值;在36—72h,HsIκBα和Hsc-Rel的部分组织的表达值逐渐恢复到基础水平,以上结果表明,HsIκBα和Hsc-Rel的表达量随着LPS的诱导而产生明显变化,说明其参与免疫应答反应,且可能存在应答LPS的NF-κB通路.