人骨髓间充质干细胞来源外泌体分离、鉴定及卵巢摄取

目的 提取及鉴定人骨髓间充质干细胞(hBMSC)来源外泌体,探讨颗粒细胞及自身免疫性早发性卵巢功能不全(POI)小鼠卵巢摄取外泌体的情况.方法 取P3至P9代hBMSC培养上清液,倒置显微镜下观察P4代hBMSC细胞形态,超高速离心法提取外泌体;纳米流式仪测外泌体粒径;透射电镜观察外泌体形态;Western blot检测外泌体标志蛋白CD63、CD9、肿瘤易感基因(TSG)101表达.外泌体采用DiR进行荧光标记;共聚焦显微镜观察人卵巢颗粒细胞(KGN)共孵育24 h和48 h摄取外泌体的情况;用ZP3蛋白多肽构建自身免疫性POI小鼠模型,在建模成功后的第1、7天腹腔注射150μg DiR标记的外泌体.在第2次注射外泌体后的第14天通过活体成像仪监测小鼠卵巢摄取情况.结果 hBMSC呈纺锤状,大小均一,提取出的外泌体平均直径为(81.12±17.23)nm.透射电镜显示外泌体结构为双层膜状;外泌体表面相关特异性蛋白CD63、CD9和TSG101呈阳性.共聚焦显微镜下观察到KGN细胞能够摄取外泌体,并与共孵育24 h比,48 h摄取的外泌体量更多.在自身免疫性POI小鼠模型中观察到小鼠卵巢部位有发光信号.结论 本研究成功提取出hBMSC来源外泌体,并观察到KGN细胞及自身免疫性POI小鼠卵巢组织摄取外泌体.