乌梅提取物对缺氧复氧诱导的心肌细胞自噬的影响

目的 探讨乌梅提取物(FME)调控磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳类动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路对缺氧/复氧(H/R)诱导的H9C2细胞自噬反应的影响.方法 使用不同浓度FME预处理H/R诱导的H9C2细胞,确定FME给药浓度,将H9C2细胞分为对照组、H/R组、FME组(2.0 mg/ml FME)、FME+PI3K 抑制剂组(2.0 mg/ml FME+50.0 pmol/L LY294002)、FME+mTOR 抑制剂组(2.0 mg/ml FME+50.0μmol/L Rapamycin),流式细胞仪检测H9C2细胞凋亡率,透射电子显微镜观察自噬的形成,激光共聚焦显微镜观察细胞自噬体水平,Western blot检测微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ/Ⅰ(LC3 Ⅱ/Ⅰ)、自噬降解底物(p62)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bax)、PI3K/Akt/mTOR通路相关蛋白表达.结果 与对照组比较,H/R组细胞凋亡率、自噬体、自噬溶酶体、LC3Ⅱ/Ⅰ、Caspase-3、Bax表达水平显著升高,p62、磷酸化PI3K(p-PI3K)、磷酸化Akt(p-Akt)、磷酸化mTOR(p-mTOR)表达水平明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05);与H/R组比较,FME组细胞凋亡率、自噬体、自噬溶酶体、LC3Ⅱ/Ⅰ、Caspase-3(0.31±0.05 vs 0.87±0.10)、Bax表达水平明显降低,p62、p-PI3K、p-Akt、p-mTOR表达水平明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05).FME+PI3K抑制剂组和FME+mTOR抑制剂组细胞凋亡率、自噬体、自噬溶酶体明显高于FME组[(18.47±3.93)％,(20.61±3.64)％vs(12.26±2.35)％;(17.50±2.15)个/细胞,(16.83±3.64)个/细胞 vs(12.50±2.61)个/细胞;(15.20±2.47)个/细胞,(14.67±3.03)个/细胞vs(9.33±1.56)个/细胞,P＜0.05].结论 PI3K抑制剂与mTOR抑制剂可逆转FME对H/R诱导的H9C2细胞自噬抑制作用,FME通过激活PI3K/Akt/mTOR信号通路,抑制H/R诱导的H9C2细胞损伤与自噬.