基于Nr f2信号通路探讨茵陈蒿汤对阻塞性黄疸大鼠肾氧化应激损伤的影响及其作用机制

目的 探讨茵陈蒿汤对阻塞性黄疸大鼠肾氧化应激损伤的作用与调节核因子E2相关因子2(Nrf2)表达及核异位的关系.方法 32只雄性SD大鼠,随机分为假手术组(S组)、模型组(O组)、低剂量茵陈蒿汤组(LY组)和高剂量茵陈蒿汤组(HY组),每组8只,S组大鼠仅游离上段胆总管但不予结扎,剩余各组大鼠胆总管中上1/3行双重结扎建立阻塞性黄疸模型,7天后LY组、HY组分别予茵陈蒿汤6.3 mL/kg和18.9 mL/kg灌胃,S组、O组每日给予等体积蒸馏水灌胃,连续7天,于第14天处理大鼠.采用ELISA法测定大鼠血清总胆红素(TBil)、直接胆红素(DBil)、丙氨酸转氨酶(ALT)、谷氨酰转移酶(GGT)、尿素氮(BUN)和血肌酐(Cr)水平;分光光度法检测大鼠肾组织氧化应激因子超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)活性;实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹法分别检测肾组织中Nrf2、Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)、醌氧化还原酶1(NQO1)mRNA和蛋白表达水平;免疫组化检测肾组织中Nrf2蛋白的核异位情况.计量资料多组间比较采用单因素方差分析,组内进一步两两比较采用LSD-t检验.结果 与S组比较,O组大鼠TBil、DBil、ALT、GGT、BUN、Cr水平升高,SOD活性减弱,MDA水平升高,差异均有统计学意义(P值均<0.05);与O组比较,LY组和HY组肝、肾功能指标水平均下降,SOD活性升高,MDA水平降低,差异均有统计学意义(P值均<0.05).与S组比较,O组大鼠肾组织中Nrf2、NQO1 mRNA和蛋白表达水平均明显下降(P值均<0.05);与O组比较,LY组和HY组Nrf2、NQO1 mRNA和蛋白表达水平均明显升高(P值均<0.05);各组大鼠肾组织中Keap1蛋白表达水平无明显差异(P>0.05).与S组比较,O组大鼠肾组织中Nrf2细胞核内阳性率显著降低(P<0.05);与O组比较,LY组和HY组Nrf2细胞核内阳性率均显著升高(P值均<0.05).结论 茵陈蒿汤可以有效减轻阻塞性黄疸引起的肾损伤,其作用机制可能是通过上调大鼠肾组织中Nrf2蛋白的表达,并调控Nrf2蛋白核异位,从而介导下游NQO1蛋白的表达,调节阻塞性黄疸引起的氧化应激反应,进而减轻大鼠肾损伤.