木犀草素调控Nrf2-Gpx4介导铁死亡途径抑制AngⅡ诱导心肌细胞肥大

目的:探究木犀草素对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导下心肌细胞肥大的影响及分子机制.方法:体外培养大鼠心肌细胞H9c2,MTT法检测木犀草素对AngⅡ诱导下心肌细胞活力的影响,以筛选木犀草素的实验浓度.将H9c2细胞分为6组:正常对照组、模型组、木犀草素25μmol/L组、木犀草素50μmol/L组、Nrf2抑制剂brusatol(100 nmol/L)组、木犀草素50μmol/L+brusatol组,根据分组给予相应的药物预处理,再用AngⅡ诱导建立心肌细胞肥大模型.AngⅡ处理48 h后,Texas RedTM-X鬼笔环肽免疫荧光染色检测各组细胞表面积;RT-qPCR检测各组细胞中肥大相关基因(ANP、BNP、NFATc1)的mRNA表达;试剂盒检测各组细胞中MDA、GSH、SOD、Fe2+水平,DCFH-DA荧光探针法检测各组细胞中ROS含量;Western Blot检测各组细胞中Nrf2、HO-1、Gpx4、xCT蛋白表达.结果:木犀草素50μmol/L对AngⅡ处理的细胞活力无明显影响,经100μmol/L木犀草素处理的细胞活力显著降低(P<0.05),故采用25、50μmol/L木犀草素研究其抗心肌细胞肥大作用.与正常对照组比较,模型组心肌细胞表面积、ROS荧光强度、MDA、Fe2+水平及ANP、BNP、NFATc1 mRNA表达显著升高,细胞中SOD、GSH水平及核Nrf2、Gpx4、xCT、HO-1蛋白表达显著降低(P<0.05).与模型组比较,木犀草素25、50μmol/L组心肌细胞表面积、ROS荧光强度、MDA、Fe2+水平及ANP、BNP、NFATc1 mRNA表达显著降低,细胞中SOD、GSH水平及核Nrf2、Gpx4、xCT、HO-1蛋白表达显著升高(P<0.05).Brusatol可逆转木犀草素的作用(P<0.05).结论:木犀草素可抑制氧化应激,减轻AngⅡ诱导的H9c2心肌细胞肥大,其作用机制可能与增强Nrf2的核转录,激活Nrf2/Gpx4通路,抑制铁死亡有关.