继发性甲状旁腺功能亢进疾病相关分子的筛选与验证

背景与目的:继发性甲状旁腺功能亢进(SHPT)是慢性肾脏疾病(CKD)最棘手的并发症之一,伴随着一系列的钙磷代谢紊乱、骨软化症与小肠吸收不良等症状,严重影响了患者的生存质量.目前临床上治疗效果不佳,尚未发现理想的靶点分子.因此,本研究旨在寻找SHPT的疾病相关分子,从而为其治疗提供新的靶点.方法:收集2017-2020年中南大学湘雅医院病理科5例新鲜正常甲状旁腺组织,15例SHPT患者甲状旁腺组织,其中2例正常甲状旁腺组织及5例SHPT患者甲状旁腺组织用于RNA转录组测序,获取差异表达基因,并通过功能富集分析、构建PPI网络和拓扑算法识别出核心基因;分别用qRT-PCR法与Western blot法验证核心基因在其余正常甲状旁腺组织与SHPT甲状旁腺组织中的表达.采用免疫组化法检测核心基因在36例SHPT甲状旁腺组织石蜡标本与16例甲状腺手术误切的正常甲状旁腺石蜡标本中的表达.结果:RNA测序发现1 323个差异基因;构建PPI网络和拓扑算法,最终筛选出10个关键基因;其中,二肽基肽酶4(DPP4)因与糖尿病密切相关,而被用于进一步的验证.qRT-PCR结果显示,SHPT患者甲状旁腺组织中DPP4mRNA表达水平明显高于正常甲状旁腺组织(P=0.005 1);Western blot结果显示,SHPT患者甲状旁腺组织中DPP4蛋白表达水平明显高于正常甲状旁腺组织(P=0.006 0);免疫组化结果显示,DPP4在SHPT患者甲状旁腺组织中的阳性率明显高于正常甲状旁腺组织(P=0.006 9).结论:SHPT患者的甲状旁腺组织中,DPP4的表达水平明显上调,因此,DPP4可能参与SHPT的发生发展,或有望作为SHPT的药物治疗的潜在靶点.