慢性束缚应激对小鼠海马N6-甲基腺苷及相关酶表达的影响

目的 探讨慢性束缚应激对小鼠海马N6-甲基腺苷(m6A)及相关酶表达影响.方法 将20只C57BL/6J雄鼠随机分成对照(control)组、慢性束缚应激模型(CRS)组;给予CRS组小鼠3周慢性束缚应激建立小鼠焦虑模型,采用旷场实验和高架十字迷宫实验检测各组小鼠焦虑样行为变化;采用免疫组织化学法和m6A RNA甲基化检测试剂盒检测小鼠海马m6A的表达变化;采用Western blotting和Real-time PCR方法分析海马m6A相关酶表达变化.结果 1.小鼠焦虑相关行为学检测结果显示,与control组相比,CRS组小鼠在旷场内框停留时间明显下降(P＜0.01);高架十字迷宫开放臂探索时间减少(P＜0.0001);2.m6A RNA甲基化检测试剂盒检测结果显示,与control组相比,CRS组小鼠海马m6A含量明显减少(P＜0.05);免疫组化结果显示,与control组相比,CRS组小鼠海马m6A阳性产物明显减少(P＜0.001);3.PCR结果显示,与control组相比,CRS组小鼠海马去甲基化酶间变性淋巴瘤激酯B(AlkB)同源蛋白5(ALKBH5)(P＜0.001)、脂肪和肥胖相关蛋白(FTO)表达显著上调(P＜0.05);甲基化酶Wilms肿瘤蛋白1相关蛋白(WTAP)(P＜0.05)表达显著下调;m6A甲基化结合蛋白YTH结构域家族蛋白3(YTHDF3)(P＜0.05)和YTH结构域蛋白2(YTHDC2)(P＜0.01)表达显著上调.Western blotting结果显示,与control组相比,CRS组小鼠海马去甲基化酶ALKBH5(P＜0.05)、FTO(P＜0.05)表达显著上调;甲基化酶WTAP(P＜0.01)表达显著下调;m6A甲基化结合蛋白YTHDF3(P＜0.01)和YTHDC2(P＜0.05)表达显著上调.结论 在慢性束缚应激所致小鼠焦虑与海马m6A表达下调有关,其机制可能与m6A甲基化酶WTAP表达下调或去甲基化酶ALKBH5和FTO表达上调相关.