HIF1α通过启动ALKBH5调控整合素蛋白αν表达的机制研究

目的:探索缺氧诱导因子1α（hypoxia inducible factor 1α，HIF1α）启动N6-甲基腺苷（N6-methyladenosine，m6A）去甲基化酶ALKBH5改善子宫内膜容受性分子标志物整合素蛋白αν（integrin αν，ITGAV）表达的内在机制。方法:利用人子宫内膜癌Ishikawa细胞，低氧以及干扰HIF1α条件下实时荧光定量PCR（real time quantity PCR，RT-PCR）或Western blotting检测ALKBH5的表达；过表达或干扰ALKBH5表达后，RT-PCR或Western blotting检测对 ITGAV基因和蛋白表达的影响；荧光素酶报告基因系统分析miR-136-5p靶向 ITGAV mRNA表达；RNA pull-down分析及m6A甲基化检测ALKBH5与miR-136-5p竞争性结合 ITGAV mRNA上甲基化位点序列。 结果:低氧条件下HIF1α时间依赖性促进ALKBH5蛋白在Ishikawa细胞中的表达。过表达ALKBH5后，ITGAV的表达水平升高（ P<0.001），Ishikawa细胞增殖能力增强（ P<0.001）； ALKBH5敲除后，ITGAV的表达水平降低（ P<0.001），Ishikawa细胞的增殖能力下降（ P=0.019）。miR-136-5p靶向调节 ITGAV mRNA后， ITGAV mRNA（ P=0.007）和蛋白表达水平（ P=0.015）下调。miR-136-5p靶向调节ITGAV的序列与ALKBH5所识别的甲基化位点所在序列重叠，两者在调控 ITGAV mRNA上存在竞争性。 结论:HIF1α通过调控ALKBH5，竞争性地结合miR-136-5p所靶向的 ITGAV mRNA上特定序列，精细化调节ITGAV的表达，改善子宫内膜容受性。