糖酵解关键酶PFKFB3对婴幼儿血管瘤内皮细胞增殖、迁移及凋亡的影响

目的 研究糖酵解关键酶6-磷酸果糖-2-激酶/果糖-2,6-二磷酸酶3(PFKFB3)对婴幼儿血管瘤(IH)内皮细胞(HemEC)生物活性的影响.方法 收集4例增殖期及4例消退期IH组织,从增殖期IH组织中提取原代HemEC,以脐静脉内皮细胞(HUVEC)为对照.通过免疫组化与Western印迹法分别检测PFKFB3在IH组织与HemEC中的表达水平.采用CCK8实验检测0～10 μmol/L PFKFB3特异性抑制剂PFK15对HemEC细胞增殖的影响.体外培养HemEC,采用5 μmol/LPFK15干预细胞,采用Transwell法观察HemEC迁移能力,流式细胞仪检测HemEC凋亡水平.组间比较采用t检验或方差分析.结果 免疫组化显示,增殖期IH组织中PFKFB3表达丰度(74.34％±5.26％)高于消退期(41.46％±2.99％,t=9.40,P＜0.001).Western印迹显示,HemEC 中PFKFB3相对表达水平(0.73±0.05)高于 HUVEC(0.45±0.04,t=8.50,P＜0.001).CCK8实验结果显示,0.625、1.25、2.5、5、10 μmol/L PFK15组HemEC增殖活性均低于对照组(均P＜0.01).Transwell实验显示,PFK15干预组HemEC迁移数(297±15)低于对照组(422±8,t=12.59,P＜0.001).流式细胞仪检测显示,PFK15干预组HemEC凋亡率(6.69％±0.64％)高于对照组(0.34％±0.07％,t=17.07,P＜0.001).结论 糖酵解关键酶PFKFB3在IH增殖期组织与HemEC中高表达,PFKFB3抑制剂PFK15可抑制HemEC增殖、迁移并促进其凋亡.