基于硼酸亲和色谱(BAC)测定单抗糖化比例方法的建立

目的:建立基于硼酸亲和色谱(BAC)测定单抗糖化比例分析方法并进行方法学验证.方法:对硼酸亲和色谱做方法优化和方法学验证,通过对流动相的盐组成、NaCl和Tris浓度的优化,建立能够有效定量单抗糖化比例的BAC分析方法,并对该方法进行方法学验证和应用评价.结果:NaCl和Tris浓度的变化会影响单抗糖化比例的检测,通过参数优化,最终确定在NaCl和Tris浓度分别为300 mmol·L-1和25 mmol·L-1时,可以对单抗糖化比例进行准确定量.根据ICH Q2和《中华人民共和国药典》2020年版对建立的方法进行了方法学验证,结果表明该方法具有良好的特异性、准确性、精密度和耐用性.单抗糖化比例在2％～90％有良好的线性,R2大于0.99,回收率在87.04％～115.29％;非糖化比例在10％～98％具有良好线性,R2大于0.99,回收率在99.69％～109.79％.精密度结果表明,该方法整体的RSD值小于18.26％.最后,利用建立的方法对利妥昔单抗原研药和生物类似药进行了糖化比例检测,发现同一厂家不同批次利妥昔单抗糖化比例差异较小,而不同厂家糖化比例存在差异.结论:建立的BAC糖化比例测定方法具有良好的准确性和精密度,可用于利妥昔单抗糖化比例的检测.