SIRT6延缓动脉粥样硬化病程进展的机制研究

目的 分析SIRT6延缓动脉粥样硬化病程进展的机制.方法 本实验时间为2022年1-10月.动物实验:将10只SPF级野生型雄性C57BL小鼠作为对照组,随机选取10只雄性ApoE-/-小鼠作为动脉粥样硬化组,剩余10只雄性ApoE-/-小鼠作为动脉粥样硬化+SIRT6-/-组.对照组小鼠采用普通饲料喂养16周.动脉粥样硬化组和动脉粥样硬化+SIRT6-/-组小鼠采用高脂饲料喂养16周以构建动脉粥样硬化模型.此外,动脉粥样硬化+SIRT6-/-组小鼠采用Cre-LoxP方法构建巨噬细胞特异性SIRT6缺陷模型.采用HE染色检测各组小鼠动脉粥样硬化斑块面积,Western blot法检测各组小鼠主动脉组织中SIRT6、IL-32、细胞间黏附分子1(ICAM-1)表达水平,免疫荧光染色检测各组小鼠主动脉组织中CD31表达情况.细胞实验:取对数生长期的巨噬细胞RAW 264.7,将其随机分为对照组(不进行干预)、动脉粥样硬化组[采用50 μg/ml的氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)干预24 h]、动脉粥样硬化+Ad-SIRT6组(转染腺病毒Ad-SIRT6,24 h后用50 μg/ml的ox-LDL干预24 h)、动脉粥样硬化+Ad-SIRT6+Ad-IL-32组(转染腺病毒Ad-SIRT6,24 h后转染腺病毒Ad-IL-32,24 h后用50 μg/ml的ox-LDL干预24 h).采用油红O染色检测各组巨噬细胞中脂质含量.结果 HE染色结果显示,对照组小鼠动脉粥样硬化斑块面积为0;动脉粥样硬化组小鼠动脉粥样硬化斑块面积小于动脉粥样硬化+SIRT6-/-组(P＜0.05).动脉粥样硬化组、动脉粥样硬化+SIRT6-/-组小鼠主动脉组织中SIRT6表达水平低于对照组,IL-32、ICAM-1表达水平高于对照组(P＜0.05);动脉粥样硬化+SIRT6-/-组小鼠主动脉组织中SIRT6表达水平低于动脉粥样硬化组,IL-32、ICAM-1表达水平高于动脉粥样硬化组(P＜0.05).免疫荧光染色结果显示,对照组小鼠血管内膜表面光滑完整,无增厚现象;动脉粥样硬化组小鼠可见粥样硬化斑块形成,血管内膜表面欠光滑且不完整;相较于动脉粥样硬化组,动脉粥样硬化+SIRT6-/-组小鼠血管内膜下可见明显的脂质沉积,血管内膜表面欠光滑且不完整.油红O染色结果显示,对照组巨噬细胞中并未发现脂质堆积,动脉粥样硬化组巨噬细胞中脂质含量较对照组明显增多,动脉粥样硬化+Ad-SIRT6组巨噬细胞中脂质含量较动脉粥样硬化组明显减少,动脉粥样硬化+Ad-SIRT6+Ad-IL-32组巨噬细胞中脂质含量较动脉粥样硬化+Ad-SIRT6组明显增多.结论 SIRT6可通过下调IL-32的表达来抑制炎症反应,从而改善内皮细胞功能,减少巨噬细胞中脂质沉积,从而减少泡沫细胞的形成,进而抑制动脉粥样硬化斑块的形成,最终延缓动脉粥样硬化病情进展.