靶向切割猪Y染色体的CRISPR/Cas9载体构建及功能验证

[目的]通过CRISPR/Cas9系统对Y染色体多位点切割,实现目标染色体的敲除,为畜禽性别控制提供新的手段.[方法]以CRISPR/Cas9技术为基础,寻找Y染色体上能被sgRNA特异性识别的多拷贝重复序列,并通过体外切割、定量分析、核型鉴定验证其对靶点的有效性.[结果]所设计的sgRNA能够在体外实现对靶片段的明显切割,且切割效率均达到了 50％以上.基因的定量分析结果证明了其在细胞水平切割的有效性,且簇状重复序列切割效果明显优于散在重复序列;核型鉴定结果证实了细胞水平猪Y染色体的丢失.[结论]研究结果为后续构建染色体敲除猪,实现猪的性别控制奠定了基础.