太子参参须多糖对RAW264.7细胞免疫调节作用的研究

为研究太子参参须多糖(RPFRP)对小鼠单核巨噬细胞(RAW264.7细胞)的免疫调节作用及作用机制,本研究利用MTT法检测不同浓度RPFRP作用下的RAW264.7细胞的增殖情况,筛选出RPFRP的适宜浓度为25 μg/mL～400 μg/mL.将25 μg/mL～400 μg/mL RPFRP作用于RAW264.7细胞并于不同时间后收获细胞培养物或上清液进行后续试验.采用中性红法检测不同浓度RPFRP作用下的RAW264.7细胞的吞噬活性,结果显示:RPFRP可极显著提高RAW264.7细胞吞噬活性(P＜0.01),且该吞噬活性在PRFRP浓度为25 μg/mL～200 μg/mL时呈剂量依赖式升高;Griess法检测RAW264.7细胞的NO产生量,结果显示:RAW264.7细胞上清液中NO含量显著升高(P＜0.05),且呈RPFRP剂量依赖式升高;ELISA法检测RAW264.7细胞的白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,结果显示:与空白对照组相比,RPFRP处理的RAW264.7细胞上清液中IL-6、IL-1β、TNF-α和IL-10的含量极显著或显著上升(P＜0.01、P＜0.05),且在RPFRP浓度为25 μg/mL～200 μg/mL时呈剂量依赖式升高;qRT-PCR检测RAW264.7细胞的诱导型-氧化氮合酶(iNOS)、细胞因子、核转录因子-кB(NF-кB)、髓样分化因子88(MyD88)和Toll样受体4(TLR4)mRNA转录水平,结果显示:RPFRP处理的RAW264.7细胞中iNOS、IL-6、IL-10、TNF-α的mRNA转录水平均呈剂量依赖式增加(P＜0.01),IL-1β、MyD88和NF-кB的mRNA转录水平在RPFRP浓度为25μg/mL～200 μg/mL时呈剂量依赖式升高(P＜0.01),仅在RPFRP浓度为400 μg/mL时有所降低,而TLR4 mRNA的转录水平则呈剂量依赖式降低(P＜0.01);western blot检测RAW264.7细胞中TLR2、TLR4、β干扰素TIR结构域衔接蛋白(TRIF)、MyD88、NF-κB抑制蛋白α(IкB-α)、NF-кB蛋白中表达水平,结果显示:RPFRP处理的RAW264.7细胞中TLR2、MyD88、TRIF与胞核NF-кB蛋白的表达水平提高且在RPFRP浓度为50 μg/mL～200 μg/mL时呈剂量依赖式升高,而该细胞中TLR4、IкB-α和胞浆NF-кB蛋白的表达水平则在RPFRP浓度为50 μg/mL～200 μg/mL时呈剂量依赖式下降.综上可知,RPFRP可通过提高RAW264.7细胞的增殖能力、吞噬活性、分泌NO和细胞因子的能力等增强RAW264.7细胞的免疫功能,且RPFRP对RAW264.7细胞的免疫调控机制 可能是通过TLR2/4-MyD88/TRIF-NF-кB信号通路活化RAW264.7细胞来完成.