去泛素化酶OTUD3调控PTEN肿瘤相关突变体蛋白稳定性的研究

目的 探索去泛素化酶含OTU结构域蛋白3(OTUD3)在乳腺癌中对抑癌蛋白PTEN肿瘤相关突变体蛋白稳定性的调控.方法 收集50例乳腺癌患者样本,提取癌与癌旁组织的RNA后进行逆转录,对PTEN C2结构域进行PCR扩增后测序分析,鉴定乳腺癌PTEN C2结构域的肿瘤相关突变.结合现有数据库中PTEN基因的突变位点信息,将PTEN突变体的编码序列扩增后插入哺乳动物表达载体pCMV?Myc中,构建含有PTEN C2结构域肿瘤相关突变体基因的质粒载体.将上述含PTEN点突变体或截短体基因的质粒载体分别与含OTUD3基因的质粒载体共转染MCF?7细胞,通过免疫共沉淀实验、半衰期实验、泛素化实验及Western印迹实验分别检测PTEN所有突变体与OTUD3结合能力、OTUD3对部分PTEN突变体蛋白稳定性的维持能力及去泛素化修饰能力.结果 从50例乳腺癌病例中鉴定出PTEN C2结构域有3种突变,即I224M、E307K与F341V,其中F341V是本研究在乳腺癌病例中首次鉴定出的PTEN突变体.△M199、F341V以及1-319丧失了与OTUD3结合的能力,从而失去了OTUD3对其的稳定作用.结论 在乳腺癌中,PTEN的一些突变体丧失了与OTUD3结合的能力,不能对其去泛素化修饰,使得蛋白稳定性降低.