小鼠脑缺血后SOCS1动态变化及其对氧糖剥夺/复氧后BV2细胞中炎症反应的影响

目的 探讨小鼠脑缺血后细胞因子信号转导抑制蛋白1(SOCS1)动态变化及其在氧-葡萄糖剥夺再复氧(OGDR)后的小鼠小胶质细胞BV-2(BV2)炎症模型中的表达变化与潜在抗炎作用.方法 (1)建立小鼠脑缺血模型,于6 h、1 d、3 d、5 d、7 d各个时间点,以PCR技术检测小鼠脑缺血区及周围组织SOCS1 mRNA的表达变化,Western blot检测SOCS1蛋白的表达变化.(2)体外研究中对BV2细胞进行OGDR处理,模拟脑缺血再灌注的体内过程.以常氧培养的BV2细胞作为对照.在氧-葡萄糖剥夺(OGD)后0.5 h、1 h、2 h、3 h及OGDR后0 h、3 h、6 h、12 h,Western blot法检测SOCS1蛋白表达水平,选取氧糖剥夺复氧炎症模型最佳效果时间点,后续所用OGDR模型皆以最佳效果时间点制作.(3)Western blot法检测OGDR处理后BV2细胞中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)和诱导型一氧化氮合酶(INOS)表达水平.(4)运用质粒构建技术构建SOCS1质粒转染BV2细胞,以空载质粒转染BV2细胞作为参照,经Western blot法检测转染质粒后的BV2细胞中SOCS1的蛋白表达水平升高与否验证质粒转染是否成功,转染成功后继续将BV2细胞分为对照组、SOCS1质粒组、空载质粒组+OGDR、SOCS1质粒组+OGDR,Western blot检测各组SOCS1蛋白及TNF-α、IL-1β、IL-6和INOS的表达水平.结果 (1)与假手术组比较,小鼠脑缺血各个时间点(6 h、1 d、3 d、5 d、7d)SOCS1 mRNA及蛋白表达均增加,表达高峰位于5 d(P＜0.05).(2)与对照组比较,OGD(0.5 h、1 h、2 h、3 h)SOCS1蛋白表达增加,表达高峰位于2 h(P＜0.05).与对照组相比较,OGDR(0 h、3 h、6 h、12 h)SOCS1蛋白表达增高,表达高峰位于6 h(P＜0.05).因此选取氧糖剥夺复氧炎症模型预实验结果显示最佳效果时间点为缺氧2 h、复氧6 h用于后续实验.(3)与对照组比较,OGDR后BV2细胞中IL-1β、IL-6和TNF-α的蛋白水平均升高(均P＜0.05).(4)与对照组和空载质粒组比较,SOCS1质粒组SOCS1蛋白表达升高(P＜0.05);与空载质粒+OGDR组相比,SOCS1质粒+OGDR组中IL-1β、IL-6和TNF-α的蛋白表达水平降低,INOS的蛋白表达水平升高(均P＜0.05).结论 小鼠脑缺血后SOCS1蛋白表达升高,在体外实验OGDR后BV2细胞中SOCS1蛋白表达增加,SOCS1高表达可降低BV2细胞OGDR炎症模型中IL-1β、IL-6和TNF-α的表达,可能在缺血性脑卒中再灌注损伤的炎症反应中发挥重要作用.