基于AMPK/SIRT1通路介导的自噬途径研究清肺止咳方治疗急性支气管炎小鼠模型的作用机制

目的:基于AMPK/SIRT1通路介导的自噬途径研究清肺止咳方对急性支气管炎小鼠模型的治疗机制.方法:60只C57BL/6小鼠按随机数字表法分为正常对照组、模型组、清肺止咳方组、清肺止咳方+Compound C组、雷帕霉素组,雌雄各半,每组12只.除正常对照组外,其余各组小鼠以自制烟熏箱刨花和烟叶各50 g烟熏,每天刺激2次,每次30 min,共1 w,制备急性支气管炎小鼠模型.造模后清肺止咳方组灌胃54 g/kg清肺止咳方,清肺止咳方+Compound C组在清肺止咳方组基础上注射15 mg/kg AMPK抑制剂Compound C,雷帕霉素组注射4 mg/kg自噬激活剂雷帕霉素,正常对照组和模型组灌胃等体积蒸馏水,1次/d,连续1 w.HE染色观察肺组织病理学;ELISA法检测血清及BALF中IL-1β、IL-18水平;透射电镜观察肺组织中自噬小体;免疫组化检测肺组织中细胞自噬相关蛋白LC3Ⅱ表达;Western Blot检测肺组织中AMPK、p-AMPK、SIRT1蛋白表达.结果:模型组肺泡壁出现断裂,组织间水肿明显,中性粒细胞等炎症细胞出现渗出现象;清肺止咳方组、雷帕霉素组肺泡结构正常,组织水肿、炎症细胞症状缓解;清肺止咳方+Compound C组病变介于模型组和清肺止咳方组之间.与正常对照组比较,模型组血清及BALF中IL-1β、IL-18水平及肺组织中自噬小体数量LC3Ⅱ蛋白阳性率、p-AMPK/AMPK水平、SIRT1蛋白表达显著升高(P<0.05).与模型组比较,各给药组血清及BALF中IL-1β、IL-18水平显著降低,肺组织中自噬小体数量LC3Ⅱ蛋白阳性率、p-AMPK/AMPK水平、SIRT1蛋白表达显著升高(P<0.05).AMPK抑制剂Compound C能显著抑制清肺止咳方上述作用.与清肺止咳方+Compound C组比较,自噬激活剂雷帕霉素组血清及BALF中IL-1β、IL-18水平显著降低,肺组织中自噬小体数量、LC3Ⅱ蛋白阳性率、p-AMPK/AMPK水平、SIRT1蛋白表达显著升高(P<0.05).结论:清肺止咳方能激活AMPK/SIRT1通路介导的自噬途径从而缓解急性支气管炎小鼠肺组织炎症损伤.