反式自主转运蛋白紧密黏附素Intimin离体重组系统的建立

目的:构建反式自主转运蛋白的离体重组系统，以用于深入研究反式自主转运蛋白的跨膜转运机制。方法:以大肠埃希菌紧密黏附素Intimin为例，进行离体重组系统的构建。获得Intimin的过表达菌株后，将其制备成原生质球，诱导Intimin表达。纯化重组表达的桶状蛋白组装复合物，将其制备成蛋白脂质体。反应体系中加入蛋白酶K处理后，观察转运是否成功。结果:原生质球诱导表达未折叠的Intimin后，向体系中加入桶状蛋白组装复合物制备的蛋白脂质体，反应结束后加入蛋白酶K处理。与不加蛋白脂质体的对照组相比，能观察到Intimin不被蛋白酶K消化，表明Intimin被成功转运至膜上。结论:反式自主转运蛋白Intimin的跨膜转运需要桶状蛋白组装复合物的参与。本研究成功建立反式自主转运蛋白的离体重组系统，从而有助于深入研究反式自主转运蛋白的跨膜转运机制。