2-DG阻断乳酸生成对HT22神经元低氧性损伤的影响及其机制

目的:探讨阻断乳酸生成对神经元HT22低氧性损伤的影响.方法:2-脱氧-D-葡萄糖(2-DG)是一种不可代谢的葡萄糖类似物,可通过阻断糖酵解过程而抑制乳酸生成.将HT22细胞分为4组:对照组、2-DG组、Hy-poxia组和2-DG+Hypoxia组.对照组与2-DG处理组放置于37℃、5％CO2培养箱中常规培养,Hypoxia组与2-DG+Hypoxia组放置于低氧培养箱中培养.2-DG浓度为2.5、5 mmol/L,氧气浓度为0.3％,处理时间为24 h.CCK-8法检测细胞活性,分光光度法检测细胞培养液中乳酸含量,荧光染色观察细胞形态,流式细胞术检测活性氧(ROS),酶活性试剂盒测定超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)的活性,蛋白印迹(Western blot)检测p-p38,t-p38和β-actin的蛋白表达水平的变化.结果:与对照组相比,2-DG组培养液乳酸水平与细胞活性明显降低(P<0.01),贴壁细胞数量减少,ROS水平升高(P<0.01),CAT酶活性降低(P<0.05).Hypoxia组中培养液的乳酸水平明显增加(P<0.01),细胞活性降低(P<0.01),贴壁细胞数量减少,ROS水平升高(P<0.01),CAT、SOD酶活性降低(P<0.01或P<0.05),2-DG+Hypoxia组乳酸水平显著降低(P<0.05),细胞活性显著降低(P<0.01),细胞数量与贴壁能力明显减弱,ROS水平显著升高(P<0.01),CAT、SOD酶活性显著降低(P<0.01),p-p38蛋白表达水平显著升高(P<0.05),t-p38没有变化.与Hypoxia组比较,2-DG+Hypoxia组能够抑制低氧诱导的乳酸水平升高(P<0.01),细胞活性显著降低(P<0.01),ROS水平显著升高(P<0.01),CAT的酶活性显著降低(P<0.01).结论:阻断乳酸生成可降低低氧下细胞活性水平,加重HT22细胞氧化应激损伤,其机制可能通过升高ROS水平、激活p38信号通路.