大黄素对嗜水气单胞菌的抑菌作用及其机制

为了探究大黄素对嗜水气单胞菌的体外抑菌作用及其机制,本试验采用二倍稀释法检测大黄素最低抑菌浓度(MIC)及其对试验菌生长曲线的影响;检测培养液中碱性磷酸酶(AKP)活性,以分析大黄素对试验菌细胞壁通透性的影响;检测β-D-半乳糖苷酶活性和DNA含量,以探究大黄素对试验菌细胞膜通透性的影响;采用结晶紫染色法检测大黄素对试验菌生物膜形成的影响;检测大黄素对外毒素溶血活性和内毒素分泌量的影响及其对感染鲫鱼的保护作用.结果显示,大黄素MIC为32 μg/mL,可明显抑制嗜水气单胞菌生长.与二甲亚砜(DMSO)对照相比,大黄素浓度≥32 μg/mL时,培养液中AKP活性、β-D-半乳糖苷酶活性和DNA含量均显著升高(P＜0.05);大黄素浓度为4～16 μg/mL时,生物膜形成量显著降低(P＜0.05);大黄素浓度为32～128 μg/mL时,培养液中外毒素的溶血百分比为(36.97±3.60)％～(75.15±7.29)％(P＜0.05),内毒素的分泌量无显著变化(P＞0.05).鲫鱼注射大黄素[≥64 mg/(kg·bw)]后感染嗜水气单胞菌(2x106CFU/尾),72 h存活率(50％～60％)高于未注射大黄素的感染鱼(0).结果表明,大黄素通过破坏嗜水气单胞菌细胞壁完整性、增加细胞膜通透性发挥抑菌作用,还可抑制其生物膜形成和外毒素的溶血活性,提高感染模型的抗病力,有望进一步开发为新型抗菌药替代品.