淤胆通方对α-萘异硫氰酸酯诱导的胆汁淤积小鼠肠道菌群和肠道屏障功能的影响

目的 观察淤胆通方对α-萘异硫氰酸酯(ANIT)诱导的胆汁淤积小鼠的治疗作用,并基于肠道菌群和肠道屏障功能探讨其作用靶点和机制.方法 将24只C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组、淤胆通方组、熊去氧胆酸(UDCA)组,每组6只.模型组、淤胆通方组、UDCA组小鼠分别于第1天、第4天、第7天、第10天、第13天予ANIT 35 mg·kg-1·d-1灌胃,淤胆通方组、UDCA组小鼠每天分别予淤胆通方、UDCA灌胃,连续15 d,第16天取材.观察肝脏组织病理学,检测肝功能指标;免疫组化法检测肝caspase-1、IL-1β、FXR的蛋白表达,流式细胞术检测肝脏CD11b+、CD86+、CD45+免疫细胞的比例;对粪便微生物进行16S rDNA测序及信息分析;免疫组化法检测肠FXR/NLRP3通路的蛋白表达,免疫荧光法检测肠E-cadherin、Occludin的蛋白表达.当计量资料满足方差齐性,多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验;当资料不满足方差齐性,采用Welch检验,进一步两两比较采用Games-Howell检验.结果 HE染色显示,模型组小鼠的部分肝细胞脂肪变性,肝小叶内肝细胞大面积坏死,肝小叶结构破坏,伴有大量炎性细胞浸润,淤胆通方组和UDCA组小鼠的肝细胞脂肪变性减轻,肝小叶内肝细胞坏死不明显,炎性细胞减少;模型组小鼠的血清ALT、AST、GGT、ALP、TBil、DBil、TBA水平较对照组明显升高(P值均<0.05);与模型组相比,淤胆通方组的血清ALT、AST、GGT、ALP、TBil、DBil、TBA水平显著降低(P值均<0.05),UDCA组的血清GGT、TBil、DBil、TBA水平显著下降(P值均<0.05).与对照组比较,模型组肝脏caspase-1、IL-1β水平明显升高、肝FXR的表达明显下降(P值均<0.05),与模型组比较,淤胆通方组肝脏caspase-1、IL-1β水平及UDCA组肝脏IL-1β水平显著下降,淤胆通方组和UDCA组的肝FXR表达水平显著升高(P值均<0.05).模型组的肠道菌群组成较对照组发生显著变化(P<0.05);淤胆通方组的肠道菌群结构与模型组存在统计学差异(P<0.05);UDCA组肠道菌群构成与对照组、模型组均有统计学差异(P值均<0.05);相对于对照组,模型组的肠道嗜黏蛋白阿克曼菌丰度明显升高,约氏乳杆菌丰度明显下降(P值均<0.05);与模型组比较,淤胆通方组、UDCA组嗜黏蛋白阿克曼菌的丰度均显著下降,淤胆通方组的鼠乳杆菌、UDCA组的鼠乳杆菌和假长双歧杆菌的丰度均明显升高(P值均<0.05).与对照组比较,模型组的肠FXR蛋白表达明显降低,肠NLRP3蛋白表达明显升高,肠E-cadherin和Occludin表达均明显下降(P值均<0.05);与模型组相比,淤胆通方组和UDCA组的肠FXR表达显著上调,肠NLRP3表达显著下降,肠E-cadherin和Occludin的蛋白表达均显著升高(P值均<0.05).结论 淤胆通方可减轻ANIT诱导的胆汁淤积小鼠的肝损伤,改善肠道菌群和增强肠壁屏障功能可能是其作用靶点和机制之一.