TET1基因对小鼠uNK细胞增殖及IFN-γ、VEGF-C和TGF-β1转录水平的影响

本研究旨在了解去甲基化酶1(ten eleven translocation,TET1)对小鼠子宫内自然杀伤细胞(uterine natu-ral killer,uNK)的增殖及其细胞因子分泌表达的影响.采集妊娠9～12 d小鼠子宫内膜,分离淋巴细胞,使用链霉亲和素磁珠法进一步分选uNK细胞进行培养;针对TET1基因合成RNA干扰序列,并将其连接入RNA干扰载体GM-19167,构建干扰表达质粒,包装成慢病毒(lentivirus)并进行病毒滴度的测定;按照慢病毒与细胞数(10～200):1的比例转染uNK细胞,168 h后荧光显微镜检测转染效果,收集uNK细胞,以β-actin为内参进行荧光定量PCR检测以验证TET1基因的干扰效果,利用Cell Counting Kit-8(CCK8)对uNK细胞的增殖情况进行检测,分别合成γ干扰素(interferon-γ,IFN-γ)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor C,VEGF-C)和β1 转化因子(transforming growth factor-β1,TGF-β1)3种细胞因子的检测引物,通过荧光定量PCR方法进行检测.结果发现,慢病毒感染168 h后uNK细胞中TET1的表达量显著下降(P＜0.05);CCK8试验结果显示,与空载体病毒感染和空白对照组相比较,TET1干扰后其细胞增殖不受影响(P＞0.05);荧光定量PCR检测结果显示,细胞因子TGF-β1的表达水平显著上升(P＜0.01),而IFN-γ和VEGF-C两种细胞因子均显著下降(P＜0.05).下调TET1基因的表达不影响uNK细胞的正常增殖,但会影响其细胞因子的转录,进而对动物子宫内的天然免疫发挥重要作用.