Mmu-miR-27a-5p促进巨噬细胞极化对脊髓损伤恢复的研究

目的 探讨mmu-miR-27a-5p对小鼠脊髓损伤处巨噬细胞极化及后肢运动功能恢复的影响.方法 将160只SPF级雄性小鼠随机分为假手术组(A组)、模型组(B组)、mmu-miR-27a-5p移植组(C组)、mmu-miR-27a-5p阴性对照组(D组),每组40只.A组为假手术组,B组、C组和D组构建脊髓损伤模型.术后第3天开始给予治疗,A组小鼠不予处理,B组给予10 μL生理盐水损伤区域注射,C组和D组分别给予mmu-miR-27a-5p移植物悬液和mmu-miR-27a-5p阴性移植物悬液10 μL于损伤区域注射.观察小鼠行为学改变、巨噬细胞极化的情况及胶质瘢痕的变化.结果 实验过程中共死亡11只小鼠.术前四组小鼠行为学评分差异无统计学意义(P＞0.05);治疗后观察各时间点,C组行为学评分均高于B组和D组,差异有统计学意义(P＜0.01).脊髓胶质瘢痕HE染色显示A组各时间点脊髓组织正常;C组脊髓损伤后1d出血均较明显,炎症细胞聚集,在损伤7 d、14 d较B组轻;D组脊髓损伤后HE染色与B组无差别.免疫组化染色:A组棕褐色细胞形态无明显变化,C组中棕褐色细胞数量明显低于B组和D组,差异均有统计学意义(P＜0.01);B组和D组中胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)的表达显著高于C组,差异均有统计学意义(P＜0.01);A组GFAP的表达为正常形态.Western Blot检测结果显示A组白细胞介素(interleukin,IL)-1β、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α、IL-10、Arginase-1 在各时间点的表达差异无统计学意义(P=0.96),C组在术后7 d、14 d较B组和D组的IL-1β、TNF-α表达低,而IL-10、Arginase-1表达高,差异有统计学意义(P＜0.001).细胞流式检测B组和D组在术后7 d、14 d的CD16标记明显高于C组,差异有统计学意义(P＜0.001),C组Arginase-1术后7 d、14 d的标记明显高于B组和D组,差异有统计学意义(P＜0.001).结论 脊髓损伤后14 d内,通过移植mmu-miR-27a-5p促进小鼠脊髓损伤局部巨噬细胞向M2型分化,并伴随小鼠后肢运动功能的改善.