LINC00052靶向miR-148b-3p影响高糖诱导的肾小管上皮细胞增殖、凋亡及EMT的分子机制

目的 探讨LINC00052通过靶向miR-148b-3p影响高糖诱导的肾小管上皮细胞增殖、凋亡及上皮间质转化(EMT)的分子机制.方法 将肾小管上皮细胞HK-2分为对照组(NC 组)、高糖组(HG 组)、pcDNA-LINC00052+HG 组、pcDNA-NC+HG 组、anti-miR-148b-3p+HG 组、anti-miR-NC+HG 组、miR-148b-3p+pcDNA-LINC00052+HG 组、miR-NC+pcDNA-LINC00052+HG组;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测LINC00052和miR-148b-3p的表达水平;蛋白质印迹法(Western blot)检测E钙黏蛋白(E-Cadherin)、神经钙黏蛋白(N-Cadherin)、波形蛋白(vimentin)蛋白表达;CCK-8检测细胞活性;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告实验分为:miR-NC+LINC00052-WT 组、miR-148b-3p+LINC00052-WT 组、miR-NC+LINC00052-MUT 组、miR-148b-3p+LINC00052-MUT 组;将 LINC00052 过表达载体、抑制表达载体及其阴性对照转染至HK-2细胞中,分为:pcDNA-NC组、pcDNA-LINC00052组、si-NC组、si-LINC00052组,检测LINC00052和miR-148b-3p的靶向关系.结果 与NC组比较,HG组的细胞活性、E-Cadherin 和 LINC00052 表达水平降低(均 P＜0.001),miR-148b-3p、N-Cadherin 和 vimentin表达水平、细胞凋亡率升高(均P＜0.001).与pcDNA-NC+HG组比较,pcDNA-LINC00052+HG组的miR-148b-3p、N-Cadherin和vimentin表达水平以及细胞凋亡率降低,E-Cadherin表达水平和细胞活性升高(均P＜0.001).与 anti-miR-NC+HG 组比较,anti-miR-148b-3p+HG 组的 miR-148b-3p、N-Cadherin和vimentin表达水平以及细胞凋亡率降低,E-Cadherin表达水平和细胞活性升高(均P＜0.001).与pcDNA-NC组比较,pcDNA-LINC00052组的LINC00052表达水平升高,miR-148b-3p表达水平降低(均P＜0.001);与si-NC组比较,si-LINC00052组的LINC00052表达水平降低,miR-148b-3p 表达水平升高(均P＜0.001).与 miR-NC+pcDNA-LINC00052+HG 组比较,miR-148b-3p+pcDNA-LINC00052+HG 组 miR-148b-3p、N-Cadherin 和 vimentin 表达水平以及细胞凋亡率升高,E-Cadherin表达水平以及细胞活性降低(均P＜0.001).结论 LINC00052通过靶向miR-148b-3p抑制高糖诱导的肾小管上皮细胞凋亡及EMT,促进细胞增殖.