上调GCLM改善缺氧复氧诱导的肾小管上皮细胞铁死亡

目的 探讨谷氨酸-半胱氨酸连接酶修饰亚基(glutamate-cysteine ligase modifier subunit,GCLM)减轻肾小管上皮细胞缺氧复氧损伤(hypoxia reoxygenation,HR)的作用与机制.方法 体外培养人近端小管上皮细胞(human proximal tubular epithelial cells,HK2),分为正常对照组(Ctrl组)、缺氧复氧组(HR组)以及GCLM过表达后的缺氧复氧组(HR+GCLM OE组),其中HR组在缺氧24 h(94％N2+1％02+5％CO2,无血清无葡萄糖的DMEM/F12培养基)后复氧6 h(95％空气+5％C()2),HR+GCLM OE组在转染了 GCLM过表达质粒24 h后,再缺氧复氧处理.检测各组GCLM、谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)的表达水平,谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)等铁死亡相关指标并通过透射电镜观察线粒体形态.结果 与对照组相比,HR组丙二醛以及活性氧蓄积(P＜0.01),谷胱甘肽显著降低(P＜0.01),透射电镜线粒体出现铁死亡改变,同时伴随着GCLM和GPX4表达下降(P＜0.01).与HR组相比,过表达GCLM能显著缓解活性氧以及丙二醛的蓄积(P＜0.01),促进谷胱甘肽的生成以及GPX4的表达(P＜0.01),缓解缺氧复氧介导的肾小管上皮细胞损伤.结论 上调GCLM可能通过抑制铁死亡而改善缺氧复氧损伤,提示GCLM在急性肾损伤中有着潜在的治疗作用.