靶向CD19的CAR-NK92细胞构建及其对相关肿瘤细胞的杀伤作用观察

目的 构建靶向分化群抗原19(CD19)的嵌合抗原受体(CAR)-NK92细胞,并观察其对相关肿瘤细胞的杀伤作用.方法 用XhoI/NotI限制性内切酶将靶向CD19的单链抗体序列与pMFG逆转录病毒载体进行双酶切,回收纯化片段后用连接酶进行连接,构建CAR001、CAR002质粒,进行NK92细胞的转导和逆转录病毒载体的包装,构建靶向CD19的CAR-NK92细胞,分别为CAR001-NK92细胞、CAR002-NK92细胞.构建表达CD19抗原的Raji-luc、SW620-EGFP、RPMI-hCD19-copGFP细胞.分别将NK92细胞、CAR001-NK92细胞、CAR002-NK92细胞与表达CD19抗原的肿瘤细胞共培养,分别采用流式细胞术(靶细胞为RPMI-hCD19-copGFP细胞)、荧光素酶报告基因法(靶细胞为Raji-luc细胞)和IncuCyte法(靶细胞为SW620-EGFP细胞)观察CAR-NK92细胞对肿瘤细胞的杀伤作用,采用流式细胞术观察CAR-NK92细胞对Daudi细胞增殖的影响.结果 CAR001-NK92细胞、CAR002-NK92细胞的CAR表达率分别为99.0％、98.4％,CD19抗原表达率分别为99.6％、99.3％,成功构建靶向CD19的CAR-NK92细胞.Daudi、Raji-luc、SW620-EGFP、RPMI-hCD19-copGFP细胞的CD19抗原表达率分别为99.0％、100％、100％、99.5％,表达CD19抗原的肿瘤细胞构建成功.NK92细胞、CAR001-NK92细胞、CAR002-NK92细胞在不同效靶比下对RPMI-hCD19-copGFP细胞和SW620-EGFP细胞的杀伤效率依次增高(P均<0.05).CAR002-NK92细胞在不同效靶比下对Raji-luc细胞的杀伤效率均高于CAR001-NK92细胞(P均<0.01).NK92组和CAR002-NK92组细胞增殖能力低于CAR001-NK92组(P均<0.05).结论 成功构建的靶向CD19的CAR-NK92细胞,其对多种表达CD19抗原的肿瘤细胞具有明显的杀伤作用.