牛溶血性曼氏杆菌可视化LAMP检测方法的建立

为建立一种能够快速、高效检测牛溶血性曼氏杆菌(Mannheimia haemolytica)的可视化LAMP检测法,利用LAMP引物设计软件,以溶血性曼氏杆菌保守基因lkt C序列设计内引物、外引物及环引物,对其反应温度、Mg2+浓度、dNTPs浓度等条件进行优化,并检测了方法的敏感性、特异性及实用性.结果显示,该方法在68.2℃、6 mmol/L Mg2+、1.6 mmol/L dNTPs条件下达到最佳,40 min内完成检测并可通过肉眼判定结果,对细菌的最低检测限为6.7×10-1 cfu/μL,对lkt C重组质粒的最低检测限为7.9×102 copies/μL,敏感性高;与15种病原均不发生交叉反应,特异性好;对背景清晰小鼠肺组织样本检测结果显示该方法实用性良好,且优于普通PCR方法.表明该方法可快速、高效检测牛溶血性曼氏杆菌.