阿帕替尼通过下调STC2表达抑制肝癌细胞的紫杉醇耐药性

目的 探究阿帕替尼调节斯钙素2(STC2)表达对肝癌细胞紫杉醇耐药性的影响.方法 通过逐步增加紫杉醇浓度持续诱导正常肝癌细胞BEL-7402以构建肝癌紫杉醇耐药细胞株BEL-7402/PTX;CCK-8法检测不同浓度的阿帕替尼(0,0.5,1,2,4,8,16 μmol/L)干预BEL-7402/PTX细胞的存活率.将BEL-7402/PTX细胞分为对照组(正常培养)、8 μmol/L阿帕替尼组、16 μmol/L阿帕替尼组、pcDNA组和pcDNA-STC2组,对照组细胞正常培养,8 μmol/L阿帕替尼组和16 μmol/L阿帕替尼组细胞分别使用8 μmol/L和16 μmol/L阿帕替尼干预细胞48 h,pcDNA组和pcDNA-STC2组组细胞分别转染pcDNA和pcDNA-STC2后使用16 μmol/L阿帕替尼干预细胞48 h.CCK-8法检测各组BEL-7402/PTX细胞存活率,qRT-PCR检测细胞STC2的表达,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Transwell检测细胞侵袭,Western blot检测P-糖蛋白(P-gp)、血管内皮生长因子受体2(VEGFR-2)、多药耐药相关蛋白1(MRP1)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、波形蛋白(vimentin)和E-钙黏附素(E-cadherin)蛋白表达.结果 在相同的紫杉醇浓度下,BEL-7402/PTX细胞存活率明显高于BEL-7402细胞(P＜0.05),表明成功构建紫杉醇耐药BEL-7402细胞株.不同浓度的阿帕替尼处理BEL-7402/PTX细胞,细胞存活率均显著降低(P＜0.05),IC5o为(10.76±0.88)μmol/L,因此后续使用8μmol/L和16 μmol/L阿帕替尼浓度进行实验.与对照组相比,8 μmol/L和16 μmol/L阿帕替尼组BEL-7402/PTX细胞存活率、STC2表达、侵袭个数以及P-gp、VEGF-2、MRP1、Bcl-2、vimentin蛋白表达明显下降,凋亡率和E-cadherin表达明显上升(P＜0.05).与16 pimol/L阿帕替尼组和pcDNA组相比,pcDNA-STC2组BEL-7402/PTX细胞存活率、STC2表达、侵袭个数以及P-gp、VEGFR-2、MRP1、Bcl-2、vimentin表达明显升高,凋亡率和E-cadherin表达明显下降(P＜0.05).结论 阿帕替尼可通过抑制STC2表达减弱肝癌细胞紫杉醇耐药性.