艾地骨化醇通过抑制CYR61的表达抑制骨肉瘤细胞的增殖和转移

目的 探讨艾地骨化醇(eldecalcitol,ED-71)对骨肉瘤细胞增殖、转移和富含半胱氨酸蛋白61(CYR61)表达的影响.方法 首先,使用Lipofectamine 2000将CYR61过表达重组pcDNA3.1质粒(pcDNA3.1-CYR61组)及阴性对照pcDNA3.1质粒(pcDNA3.1-NC组)转染到人骨肉瘤细胞系(U2OS)中,通过RT-PCR和Western blot验证转染效率.然后,将U2OS细胞分为对照组、ED-71组、ED-71+pcDNA3.1-NC组和ED-71+pcDNA3.1-CYR61组,对照组和ED-71组细胞未进行转染,ED-71+pcDNA3.1-NC组细胞转染pcDNA3.1-NC,ED-71+pcDNA3.1-CYR61组细胞转染pcDNA3.1-CYR61.转染后,对照组细胞不做药物处理,其余3组细胞用含有5 nmol/L艾地骨化醇的1640培养基培养24 h.CCK-8法和集落形成实验测定U2OS细胞的增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭,RT-PCR检测细胞中CYR61 mRNA水平,Western blot 检测细胞中 CYR61、Bax、Bcl-2、MMP-2、MMP-9、Fibronectin、E-cadherin 和 N-cadherin 的蛋白表达水平.结果 与 pc-DNA3.1-NC组比较,pcDNA3.1-CYR61组细胞中CYR61的mRNA和蛋白表达水平升高(P＜0.001).与对照组比较,ED-71组中CYR61的mRNA和蛋白表达水平降低(P＜0.001),OD450 nm值降低(P＜0.001),集落数量降低(P＜0.001),细胞凋亡率升高(P＜0.001),Bax蛋白表达水平升高(P＜0.001),Bcl-2蛋白表达水平降低(P＜0.001),迁移和侵袭细胞数降低(P＜0.001),MMP-2、MMP-9 和 Fibronectin 蛋白表达水平降低(P＜0.001),E-cadherin 蛋白表达水平升高(P＜0.001),N-cadherin 蛋白表达水平降低(P＜0.001).与 ED-71+pcDNA3.1-NC 组比较,ED-71+pcDNA3.1-CYR61 组 U2OS 细胞中 CYR61 的 mRNA和蛋白表达水平升高(P＜0.001),集落数量升高(P＜0.001),OD450nm值升高(P＜0.001),细胞凋亡率降低(P＜0.001),Bax蛋白表达水平降低,Bcl-2蛋白表达水平升高(P＜0.001),迁移和侵袭细胞数升高(P＜0.001),MMP-2、MMP-9和Fibronectin 蛋白相对表达水平升高(P＜0.001),E-cadherin蛋白表达水平降低(P＜0.001),N-cadherin蛋白表达水平升高(P＜0.001).结论 艾地骨化醇通过抑制CYR61的表达抑制骨肉瘤细胞的增殖和转移能力.