柱前衍生-反相高效液相色谱法测定扶正补血食疗方胶原蛋白含量

目的 基于RP-HPLC法对扶正补血食疗方中胶原蛋白含量进行测定,并通过正交试验优选出扶正补血食疗方中胶原蛋白的最佳提取方法.方法 于2021年12月至2022年1月将样品以6 mol/L盐酸于110℃水解24 h,利用AQC试剂进行衍生,采用Diamonsil-Cl8色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以流动相A:无水乙酸钠11.48 g,三乙胺1.72 g,EDTA 1 mg,溶于1 L水中,用磷酸调pH为4.95;流动相B:乙腈水溶液(体积分数60％),梯度洗脱;柱温37℃;检测波长254 nm;流速1 mL/min;进样量10μL.以羟脯氨酸含量为评价指标,考察煎煮时间、料水比、煎煮温度对胶原蛋白含量的影响,优化其制备工艺.结果 羟脯氨酸在10～500 mg/L浓度范围内线性关系良好(Y=0.0365X+0.5173,R2=0.9991),平均回收率95.11％,相对标准偏差(RSD)为1.12％(n=6).猪蹄胶原蛋白的最佳提取工艺为:A3B1C3,即加热温度为100℃,料水比为1:8,提取时间为3 h.结论 该方法快速准确,稳定可行,可作为扶正补血食疗方中胶原蛋白含量的测定方法,为该产品质量控制及临床应用提供科学依据.